Laboratorio di Microbiologia Generale

a cura di Gabriele Giliberti

Osservazione con goccia pendente

 

L’osservazione a fresco di preparati non fissati permette di apprezzare la morfologia e la mobilità dei microrganismi. Il vetrino con la sospensione batterica da osservare può essere allestito con una tecnica “a schiacciamento”, ponendo una piccola goccia di sospensione su un vetrino portaoggetti e coprendola con un vetrino coprioggetti, oppure con la tecnica della “goccia pendente”, che si ottiene utilizzando come portaoggetti un caratteristico vetrino con una concavità emisferica al centro. Tutti i batteri sono provvisti di movimenti oscillatori, per effetto delle correnti presenti nelle soluzioni acquose, che non hanno alcuna relazione con la mobilità attiva. Alcuni batteri invece sono dotati di motilità propria, grazie alla presenza di strutture definite flagelli. I flagelli sono strutture elicoidali, costituiti da subunità proteiche (flagellina), legate alla cellula da un corpo basale, una struttura motrice ad anelli. Il tipo di disposizione dei flagelli è spesso usato come elemento distintivo nella classificazione dei batteri. L’osservazione del movimento flagellare dei microrganismi utilizzando un preparato in “goccia pendente” è nettamente superiore a quella che si ottiene per “schiacciamento”, grazie alla possibilità di osservare un ambiente tridimensionale. Un esempio di batterio flagellato è Pseudomonas aeruginosa, potenziale patogeno opportunista come già discusso, per cui l’apertura della coltura liquida e la preparazione del vetrino va effettuata sotto una cappa di sicurezza biologica a flusso verticale.

 

Protocollo sperimentale

ü    Disegnare con uno stuzzicadenti un sottile anello di silicone attorno alla concavità del vetrino per goccia pendente.

ü    Deporre con un’ansa da 10µl una goccia di coltura liquida di Pseudomonas aeruginosa al centro di un vetrino coprioggetto.

ü    Adagiare il vetrino per goccia pendente sul vetrino coprioggetti in modo da centrare con la concavità del vetrino la goccia di coltura batterica.

ü    Esercitare una leggera pressione in modo da far aderire i vetrini.

ü    Osservare il vetrino al microscopio, aumentando progressivamente l’ingrandimento fino ad utilizzare l’obiettivo ad immersione (100x) [Videoclip].

 

Movimento flagellare di cellule di Pseudomonas aeruginosa (videoclip).