Laboratorio di
Microbiologia Generale
a cura di Gabriele Giliberti
Osservazione con goccia pendente
L’osservazione a fresco di preparati non fissati permette di
apprezzare la morfologia e la mobilità dei microrganismi. Il vetrino con la
sospensione batterica da osservare può essere allestito con una tecnica “a
schiacciamento”, ponendo una piccola goccia di sospensione su un vetrino
portaoggetti e coprendola con un vetrino coprioggetti, oppure con la tecnica
della “goccia pendente”, che si
ottiene utilizzando come portaoggetti un caratteristico vetrino con una
concavità emisferica al centro. Tutti i batteri sono provvisti di movimenti
oscillatori, per effetto delle correnti presenti nelle soluzioni acquose, che
non hanno alcuna relazione con la mobilità attiva. Alcuni batteri invece sono
dotati di motilità propria, grazie alla presenza di strutture definite flagelli. I flagelli sono strutture
elicoidali, costituiti da subunità proteiche (flagellina), legate alla cellula
da un corpo basale, una struttura motrice ad anelli. Il tipo di disposizione
dei flagelli è spesso usato come elemento distintivo nella classificazione dei
batteri. L’osservazione del movimento flagellare dei microrganismi utilizzando
un preparato in “goccia pendente” è nettamente superiore a quella che si
ottiene per “schiacciamento”, grazie alla possibilità di osservare un ambiente
tridimensionale. Un esempio di batterio flagellato è Pseudomonas aeruginosa, potenziale patogeno opportunista come già
discusso, per cui l’apertura della coltura liquida e la preparazione del
vetrino va effettuata sotto una cappa di sicurezza biologica a flusso verticale.
Protocollo sperimentale
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Disegnare con uno stuzzicadenti un
sottile anello di silicone attorno alla concavità del vetrino per goccia pendente.
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Deporre con un’ansa da 10µl una
goccia di coltura liquida di Pseudomonas
aeruginosa al centro di un vetrino coprioggetto.
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Adagiare il vetrino per goccia
pendente sul vetrino coprioggetti in modo da centrare con la concavità del
vetrino la goccia di coltura batterica.
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Esercitare una leggera pressione in
modo da far aderire i vetrini.
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Osservare il vetrino al microscopio,
aumentando progressivamente l’ingrandimento fino ad utilizzare l’obiettivo ad
immersione (100x) [Videoclip].
Movimento
flagellare di cellule di Pseudomonas aeruginosa (videoclip).